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发布时间:2021-11-14 09:58:30
ProteinA亲和层析物质
UniMab和NanoMab是运用***发明生产制造的性能、耐碱性型资产重组ProteinA亲和层析物质。 该填充料各自以单分散化多孔结构型聚甲 i 基丙 i 烯酸甲酯(PMMA)脂质体和聚ben乙 i 烯球为栽培基质,运用特有的表层体现技术性并 键合ProteinA制取,适用单克 i 隆抗 i 体及其带有Fc片断的资产重组蛋白质类生物大分子的分离纯化。UniMab冲击韧性 高、反压得很低、有机化学可靠性好、耐酸性强,即便在高水流量下依然能维持较高动态性吸咐载量,能考虑从试验室制取到 产业及工业生产的各种各样要求。NanoMab是致力于迅速率剖析检验单克 i 隆抗 i 体及其带有Fc片断的资产重组蛋白质类生 物生物大分子而设计构思。
抗l体的层析分离步骤基本
都可以采用标准化的三步曲:步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩;第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体,宿主蛋白等杂质;第三步是精纯去除剩余DNA,Endotoxin,Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中,步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上,也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因:首先是Protein A 价格昂贵,其价格是普通层析介质十几倍;第二,Protein A使用寿命短,一般离子交换填料使用寿命多达1000次,而亲和填料寿命通常在100-200次;第三,Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩,需要处理大体积的发酵液,而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析,使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此,要降低抗l体的生产成本,解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。
层析填料介质
单分散基球替代多分散基球 层析介质粒径大小和粒径分布是影响层析分离的重要参数。粒径分布越均匀,装柱越容易、柱床越稳定、柱效越高、流速越均匀、洗脱越集中、分离效率越高、流动相用量越少,柱与柱重复性也越好;Protein A 介质被誉为层析介质皇冠上的明珠,价格昂贵,可是市场上Protein A 介质都是采用粒径分布较宽的基球。主要原因是单分散微球制备技术难度极大,世界上可以规模生产的单分散多孔微球只有Dynal公司一家,GE销售的SOURCE 系列单分散聚l色谱填料就是Dynal生产的。但SOURCE 产品的粒径只有30微米,不能满足Protein A 介质对粒径一般要大于40微米的要求。纳微经过多年的努力开发出世l界领l先的微球制备技术,突破大单分散大粒径多孔微球的制备难题,成为家生产单分散Protein A 亲和层析介质的公司。
离子交换层析中,为什么用氯离子洗脱阴离子
阴离子交换柱的填料是正电填料,在低盐条件下可以通过电荷相互作用吸附样品中的阴离子和负电荷物质(如DNA).这些带负电的物质由于其带电量不同,分子大小不同,因而与正电填料之间的结合力也就不同.用梯度的氯离子(一般用氯化钠梯度,例如从100mM氯化钠线性梯度升高到1M氯化钠)洗脱挂柱样品时,氯离子会和结合上的物质竞争结合正电填料,伴随着氯离子浓度的不断升高,氯离子的竞争作用越来越强,与填料结合的物质会按照亲和力从弱到强依次洗脱下来,形成***的洗脱峰,从而将这些物质分开.
阳离子交换柱与之正好相反,柱子填料为负电荷,用钠离子洗脱结合的正电物质.
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