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小粒径无孔单分散层析介质用于病毒的分离纯化

传统的层析介质填料都是多孔的微球，因为多孔微球材料的比表面积大，因而可以对一般生物分子分离提供较高的吸附载量。层析介质的孔径一般都小于2000?（通常都小于100纳米）。而很多病毒颗粒的粒径一般都大于20纳米，有的甚至都超过100纳米。由于体积排阻的原因，病毒颗粒无法扩散进入层析介质的孔内，因而在层析吸附病毒颗粒时只有介质微球的外表面可以利用，孔内表面积由于体积排阻的原因而无法吸附病毒颗粒。然而，病毒样品中的杂质分子一般都比病毒小，因而可以扩散进入层析介质孔内被吸附在里面。由于传统层析介质孔内表面积远远大于介质微球外表面积，杂质吸附往往由于孔内表面积的存在而非常显著，吸附洗脱时杂质含量因而较高，病毒颗粒纯化效果往往不理想。无孔层析介质由于没有大量只能容纳杂质进入而病毒颗粒无法扩散进入的内孔，病毒颗粒在介质外表面的层析吸附量虽然不会有明显变化，但样品中的杂质被层析吸附的量会显著减少。因此经无孔层析填料层析洗脱后，病毒样品的分离纯度显著提高。

连续色谱层析简介

众所周知，传统色谱分离技术是采用固定的色谱塔进行，***入一定量物料，然后采用洗脱剂不断洗脱，在同一出口在不同时间段就可接到不同的产品组分，此过程明显费时费力；而连续色谱分离技术则是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。在实际生产中，连续流层析可获得更高的产量，且成本更低，这是通过降低Protein A 填料用量和缓冲液消耗量实现的，由于操作稳定，其可更好地保证产品质量的一致性，并显著提高下游纯化的产量。传统色谱分离方式通常是单一色谱柱序列上样和洗脱，这就明显限制了介质的利用程度，而连续色谱层析技术平行采用多根色谱柱平行上样和洗脱，这种连续上样的方式无疑能够i大化介质的利用率。

亲和层析

配体偶联在介质上，纯化能与配体结合的生物分子;通常一步便能得到高纯的样品;配体的特异性越强，所获产品纯度越高用亲和介质提纯单抗非常方便，以重组蛋白A的载量高;蛋白G则能结合更多不同源的IgG

金属鳌合介质(Chelating Sepharose Fast Flow)可反复鳌合不同金属，再用已结合依赖不同金属的蛋白，一种介质可做多种纯化工作

其他常用配体包括:肝素-纯化.酶III，凝血因子脂酶等Cibacron Blue(颜料)-纯化白蛋白，干扰素等外源凝集素如球蛋白A-多糖，糖蛋白等Glutathione谷胱甘三肽-重组融合蛋白等等.

可自行把所需配体偶联到活化偶联介质，的是NHS activated 4 Fast Flow和CNBr activated 4 FF;要注意化学基好不会参与配体和被纯化生物分子的结合作用中