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发布时间:2021-11-16 21:28:47
UniMab的优势
单分散微球基质、高强度和短保留时间下的高动态载量
UniMab亲和层析介质相比市场上同类硬胶或软胶填料有性,“超常规柱高”之所以可惠及实际的抗i体纯化工艺,须满足3个条件:一是微球基质的单分散性,纳微***开发的单分散均一粒径的亲水PMMA微球,粒径50 μm,CV值小于5%,确保批次间重现性和峰形对称性;二是填料机械强度高,能承受更大压力(如:1MPa压力),才可装填至更大柱高;三是在更短驻留时间下具备高动态结合载量(DBC),比如2 ~ 4 min可达到35至45 mg/ml Gel的动态载量。纳微UniMab Protein A介质满足以上三个重要条件,即单分散微球基质、高强度和短保留时间下的高动态载量,因此在超常规柱高下它能发挥传统填料难以具备的优势。
超大孔单分散聚合物层析介质用于病毒分离纯化
传统生物层析介质不能有效用于病毒分离纯化很主要的原因是其孔径太小,病毒不能扩散到传统层析介质的内孔里,因此可及比表面积低,吸附载量低,而超大孔单分散层析介质由于粒径均匀,孔径大(>400 纳米)因此病毒可以有效的扩散到孔内部空间,使得静态吸附载量大幅度提升。超大孔结构还可以有效降低病毒与填料表面配基之间多位点结合,避免亚基的解聚,使得病毒结构稳定性得到大幅度的提高。另外超大孔聚合物层析介质用于病毒及类病毒(疫l苗)分离纯化的优点是其分离模式与传统生物制药层析分离纯化方法基本一样,容易放大生产,重复性好。但超大孔层析介质制备技术难度大,且其机械强度差,耐压性差,容易破碎,导致筛板堵塞,压力升高等缺点。虽然纳微已经可以制备孔径大于高达800纳米的超大孔径聚合物微球,但要满足病毒大规模分离纯化,还需要进一步解决超大孔微球机械强度问题。
以下为纳微超大孔径DEAE离子交换层析介质在流l感病毒(H5N2)纯化中的数据,结果显示超大孔介质对流l感病毒的分离纯化比传统层析介质具有明显的优势。
理想的连续色谱层析介质
在传统间歇式色谱法中,实验者只能采用单根色谱柱进行分离纯化,上样时只能序列式上样洗脱,这种方法虽然适合于绝大多数分离纯化,但其对于纯化介质的利用率并不高;在新型的连续色谱层析法中,实验者可以同时平行使用多根色谱柱并进行上样和洗脱,整个洗脱过程处于不间断的持续进行中,这种方法可以确保使用更少的缓冲液来i大化填料的利用率,目前已经证实这种新型色谱层析方案在手性和糖类化合物分离方面非常有效,尤其在单抗捕获方面经实际验证效果良好。单分散UniMab 亲和介质由于具备诸如粒径均一、柱效高、柱与柱重复性好,且机械强度高、反压低,在高流速下i载量高等一系列优点,正好满足连续色谱高流速的要求。
亲和层析
配体偶联在介质上,纯化能与配体结合的生物分子;通常一步便能得到高纯的样品;配体的特异性越强,所获产品纯度越高用亲和介质提纯单抗非常方便,以重组蛋白A的载量高;蛋白G则能结合更多不同源的IgG
金属鳌合介质(Chelating Sepharose Fast Flow)可反复鳌合不同金属,再用已结合依赖不同金属的蛋白,一种介质可做多种纯化工作
其他常用配体包括:肝素-纯化.酶III,凝血因子脂酶等Cibacron Blue(颜料)-纯化白蛋白,干扰素等外源凝集素如球蛋白A-多糖,糖蛋白等Glutathione谷胱甘三肽-重组融合蛋白等等.
可自行把所需配体偶联到活化偶联介质,的是NHS activated 4 Fast Flow和CNBr activated 4 FF;要注意化学基好不会参与配体和被纯化生物分子的结合作用中
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