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液相色谱

GC与LC的比较

由于HPLC分析不受温度和样品沸点限制，因此具有更广阔的应用潜力。经过30多年的迅速发展，液相色谱法在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟，现已成为化学化工、环境、药学、食品等多个领域中具优势的分离分析方法之一。

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HPLC对流动相的一般要求

流动相就比如***的血液，其质量直接影响到整个系统的正常运行与否。

应该使用HPLC级的溶剂，不能互相混溶的溶剂不可以直接切换!一般在水相和与其不混溶的溶剂切换时，使用异作为过渡溶剂。

注意溶剂的截止波长。截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器中使用的低波长,低于该波长后,溶剂会有很强的紫外吸收，从而影响极限的稳定性、干扰对所分析物质的检测。

HPLC所使用的水必须是新鲜的和经过0.45μm滤膜过滤过的。建议每天更换新鲜的水。长期不用时，必须把使用水的管路用置换，防止长霉。

仪器使用完后要采用适当的溶剂冲洗等方法维护色谱柱和系统。如果使用了缓冲盐一定先将盐要冲洗干净。

仪器长期不用时，不建议使用纯封存。因为有生成聚合物的趋势。建议使用、/水或/水封存。

当有流路堵塞时，可以尝试将之反接后冲洗。污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命，并且影响泵和系统的的性能。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液(pH 4 至7) 中尤其如此。

液相色谱的基本原理

液相色谱基本原理是分离度(也叫分辨率)正比于

四分之理论塔板数n的平方根乘以

选择因子a比上a-1再乘以

分离因子k+1比上k

我认为分离度和这些变量是正比关系而不是准确的等于，如果非要说是等于的关系，再加上一个常数可能会更合理。

n和柱长(正比)、粒径(反比)、固定项填料(全多孔硅胶型，表面多孔/核壳型)有关

a和流动相种类(反向色谱：和)、pH(2到9)、柱温有关

分离因子/保留因子(平衡状态下，固定相中含量与流动相中的比值)和流动相种类、流动相比例、柱温、固定相填料有关

反相液相色谱

柱内填充二氧化硅颗粒，并对其进行改性，通过将长的碳氢链（8～18个C原子）附着在其表面来实现其非极性。使用极性溶剂，例如水和醇的混合物，。由于极性溶剂和混合物中的极性分子之间具有强烈的吸引作用，混合物中的极性化合物将更快地通过色谱柱。非极性分子在通过色谱柱的过程中速度会减慢。它们主要通过范德华分散力和疏水作用与烃基形成不同程度的吸引力。它们在水流动相组分中的可溶性也较低，有助于它们与烃基的相互作用。