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发布时间:2021-11-20 01:45:26
硼酸亲和层析介质
纳微推出新一代硼酸亲和填料,它是利用硼酸与顺式二羟基化合物之间的共价配位作用实现分离纯化。在碱性条件下,硼
酸基团能与顺式二羟基结构作用,生成稳定的五元环络合物,分子被介质吸附;在酸性条件下络合被打开,分子从介质上解吸
附。硼酸亲和层析介质可以用于含有顺式二羟基化合物的分离纯化,如糖蛋白、核苷、核苷酸、糖类等的分离纯化。
抗l体的层析分离步骤基本
都可以采用标准化的三步曲:步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩;第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体,宿主蛋白等杂质;第三步是精纯去除剩余DNA,Endotoxin,Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中,步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上,也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因:首先是Protein A 价格昂贵,其价格是普通层析介质十几倍;第二,Protein A使用寿命短,一般离子交换填料使用寿命多达1000次,而亲和填料寿命通常在100-200次;第三,Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩,需要处理大体积的发酵液,而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析,使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此,要降低抗l体的生产成本,解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。
理想的连续色谱层析介质
在传统间歇式色谱法中,实验者只能采用单根色谱柱进行分离纯化,上样时只能序列式上样洗脱,这种方法虽然适合于绝大多数分离纯化,但其对于纯化介质的利用率并不高;在新型的连续色谱层析法中,实验者可以同时平行使用多根色谱柱并进行上样和洗脱,整个洗脱过程处于不间断的持续进行中,这种方法可以确保使用更少的缓冲液来i大化填料的利用率,
选择层析方法
用分离范围宽广的凝胶过滤介质如Superose, Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份
用含专一配体或的亲和层析介质结合目标蛋白,一步即可得到高纯度样品;亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质
体积大的样品,往往使用离子交换层析来浓缩和粗纯化;高盐洗脱的样品再用疏水层析纯化
疏水层析用高盐吸附,低盐洗脱的原理,洗脱的样品又可直接上离子交换介质;两种方法常被交替使用
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