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液相色谱仪

四元低压梯度的混合比例是通过控制不同流路的电磁阀的开闭时间长短来控制的，理论上混合的比例也是准确的，但是实际上电磁阀的开闭会有一个延迟，无论它动作多么快，总还是需要一点时间的。比如A路和B路各50%混合，在单位时间内，A路和B路的电磁阀各开通50%的时间，这时问题不大，电磁阀的延迟影响可以通过调整补偿系数来尽量弥补。但是如果一点的情况，A路99%，B路1%，这种情况下单位时间内，A路的电磁阀开通99%的时间，B路只占1%，时间是很短的，这时B路电磁阀的延迟就影响很大了，甚至可能延迟的时间比工作的时间还要长，而高压梯度就不会存在这种问题。

液相色谱法概述

液相色谱法自20世纪60年代问世以来，由于使用了高压输液泵、全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器，实现了对样品的高速、和高灵敏度的分离测定。液相色谱由于吸取了经典液相色谱的研制经验，并引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和分析精度。现在用微处理机控制的液相色谱仪，其自动化程度很高，既能控制仪器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了、功能齐全的分析工具。

液相色谱的主要部件有哪些？

液相色谱的部件按流动相流路的顺序：

流动相→真空脱气机(在线脱气装置)→泵(二元泵和四元泵：区分，有几种流动相按一定比例混合)→进样器(手动和自动)→柱温箱→检测器(紫外：朗伯-比尔定律，质谱：荷质比，荧光：跃迁，e***：蒸发光)

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液相色谱柱知识

物理性质：

柱长，内径，如250*4.6mm。一般柱长在2—250mm，柱越长，分离度越高，但柱压更高，分离所需时间更长；但分离度与理论塔板数的平方根成正比，所以一昧增加柱长并不是有效的分离手段，一般情况下，150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。

粒径，影响色谱分离度。粒径越小，分离越快，柱效越高，但柱压力越高，柱容易被污染，导致柱寿命降低。常见分析柱通常使用5um填料，复杂的多组分样品分离一般使用3.5um粒径，更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍，因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。本文来源于国内的第三方检测平台嘉峪检测网，提供检测实验、技术培训、仪器计量校准服务。

孔径，60A，120A，300A等。孔径小，则含孔率高，比表面积大，载碳量高；色谱柱填料孔径大小需和分子大小相匹配，保证分子自由进出填料孔并与孔内表面的键合相进行分离分配，通常要求孔径直径是分子直径的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。

颗粒形状，一般有球形和不规则形，当使用黏度较大的流动相时，球形颗粒可以降低柱压，延长色谱柱寿命。

比表面积，指的是每克填料的表面积，如180m2/g—350m2/g，与粒度和含孔率有关；比表面积大，会增加样品与键合相之间的反应，增加保留和分离度；比表面积小则可以缩短分析时间和平衡时间，并不是比表面积大或者小就更好，需要选择合适的比表面积。