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小粒径无孔单分散层析介质用于病毒的分离纯化

传统的层析介质填料都是多孔的微球，因为多孔微球材料的比表面积大，因而可以对一般生物分子分离提供较高的吸附载量。层析介质的孔径一般都小于2000?（通常都小于100纳米）。而很多病毒颗粒的粒径一般都大于20纳米，有的甚至都超过100纳米。由于体积排阻的原因，病毒颗粒无法扩散进入层析介质的孔内，因而在层析吸附病毒颗粒时只有介质微球的外表面可以利用，孔内表面积由于体积排阻的原因而无法吸附病毒颗粒。然而，病毒样品中的杂质分子一般都比病毒小，因而可以扩散进入层析介质孔内被吸附在里面。由于传统层析介质孔内表面积远远大于介质微球外表面积，杂质吸附往往由于孔内表面积的存在而非常显著，吸附洗脱时杂质含量因而较高，病毒颗粒纯化效果往往不理想。无孔层析介质由于没有大量只能容纳杂质进入而病毒颗粒无法扩散进入的内孔，病毒颗粒在介质外表面的层析吸附量虽然不会有明显变化，但样品中的杂质被层析吸附的量会显著减少。因此经无孔层析填料层析洗脱后，病毒样品的分离纯度显著提高。

如何选择固相萃取柱？

选择固相萃取柱的关键除了要求的规格之外，决定分离性能的是它的填料。在选择萃取柱时，必须根据待检测样品的种类及其***性质选择合适的填料。固相萃取填料通常是色谱吸附剂，大致可以分为三大类，分别是以硅胶、高聚物、无机材料为基质。但SOURCE 产品的粒径只有30微米，不能满足Protein A 介质对粒径一般要大于40微米的要求。纳微经过多年的努力开发出世l界领l先的微球制备技术，突破大单分散大粒径多孔微球的制备难题，成为家生产单分散Protein A 亲和层析介质的公司。

亲和层析

配体偶联在介质上，纯化能与配体结合的生物分子;通常一步便能得到高纯的样品;配体的特异性越强，所获产品纯度越高用亲和介质提纯单抗非常方便，以重组蛋白A的载量高;蛋白G则能结合更多不同源的IgG

金属鳌合介质(Chelating Sepharose Fast Flow)可反复鳌合不同金属，再用已结合依赖不同金属的蛋白，一种介质可做多种纯化工作

其他常用配体包括:肝素-纯化.酶III，凝血因子脂酶等Cibacron Blue(颜料)-纯化白蛋白，干扰素等外源凝集素如球蛋白A-多糖，糖蛋白等Glutathione谷胱甘三肽-重组融合蛋白等等.

可自行把所需配体偶联到活化偶联介质，的是NHS activated 4 Fast Flow和CNBr activated 4 FF;要注意化学基好不会参与配体和被纯化生物分子的结合作用中

层析填料寿命衰减的影响因素

样品状态

a.样品澄清度：样品越澄清对填料的寿命衰减影响越小。

b.样品粘度：样品的粘度越小，对填料寿命的影响越小。

c.样品酸碱度：过酸过碱都会加速填料寿命的衰减。

d.样品离子强度：离子强度越高填料寿命衰减的越快。

e.样品成分组成：样品成分越复杂，层析过程越复杂，填料的寿命衰减越快（这也与填料所处的工艺阶段吻合，捕获粗纯阶段填料寿命衰减的更快，精纯阶段填料寿命衰减的慢。）

层析工艺

a.柱床高度，流速及反压越大，工艺过程填料受到的外力就会增大，填料的寿命衰减就会增大。

b.层析工艺过程的缓冲液的种类及洗脱的CV数也会影响填料的寿命，缓冲液越温和对填料寿命衰减影响越小，洗脱CV数越小对填料寿命衰减影响越小。