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发布时间:2022-04-15 03:21:01
液相色谱柱的结构
(1)液相色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝(封头)与柱填料等组成。
柱管:多用不锈钢制成,若果使用时柱压不高于70kg/cm2时,也可采用厚壁玻璃或石英管,管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。空柱各组件均为不锈钢材质,能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。压帽:即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽,中部有小孔,多为聚四氟乙烯制成,用于固定筛板。
密封环:位于接头螺旋环内壁的弹性环,多为聚四氟乙烯制成,用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。
(2)柱填料:
液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的,柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱:
多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种,其颗粒直径在3-10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合-CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱:
主要是以硅胶为基质,在其表面键合十八***官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。
常用的其他的反相填料还有键合C8、***、C2、等,其颗粒粒径在3-10μm之间。
液相色谱柱的保存
1.反向色谱柱实验后的***:
使用缓冲液或含盐的流动相,实验完后应用10%的/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用冲洗30分钟。注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的,防止将填料冲塌陷。
2.长期保存色谱柱:
如,色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下,对于反相柱可以储存于纯或中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水中,并将堵头堵上,储存温度尽量是室温。
液相色谱柱样品制备
1、样品应当尽可能溶解在能与流动相相互溶的溶剂中。除特殊指明外,如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。
2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成,会加速降低柱效。
3、色谱柱由高压匀浆法装填,能承受较高压力。为获得佳分离效果,使用时请不要超过200kgf,而且避免压力突然上升或变化,否则会造成硅胶填料的***,减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外高操作温度不要超过60℃。
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