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发布时间:2022-08-03 14:28:32
液相色谱仪在生物制药中的应用
液相色谱仪是近几十年发展起来的一种、快速的分离分析技术,是现代分离检测的重要工具。液相色谱仪是以经典液相色谱仪为基础,引入气相色谱仪的理论和实验方法,将流动相改为高压输送,采用固定相和在线检测等手段,发展而成的分离分析技术,具有高压、高速、、高灵敏度、高选择性和应用范围广等特点,成为生物制药领域发展快、应用的现代分析技术之一。
液相色谱柱外界因素影响
色谱是一种分离分析手段,分离是,因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等,其粒度一般为3,5,7,10μm等,柱效理论值可达5~16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析,只要500即可;对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子,因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。
柱效受柱内外因素影响,为使色谱柱达到佳效率,除柱外死体积要小外,还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。即使好的装填技术,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的,靠近管壁的部位比较疏松,易产生沟流,流速较快,影响冲洗剂的流形,使谱带加宽,这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中,柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。
液相色谱柱性能评价
色谱柱的性能除了与固定相性能有关外,还与填充技术有关。在正常条件下,填料粒度>20μm时,干法填充制备柱较为合适;颗粒<20μm时,湿法填充较为理想。填充方法一般有4种:①高压匀浆法,多用于分析柱和小规模制备柱的填充;②径向加压法,Waters;③轴向加压法,主要用于装填大直径柱;④干法。柱填充的技术性很强,大多数实验室使用已填充好的商品柱。
气相色谱检测器详细介绍
检测器基本原理: 从离子交换柱里下来的 带有分离出来组分的载气商品流通过检测器而造成数据信号,检测器的输入输出数据信号历经转换后变成色谱。
检测器有几种种类,但检测器的作用全是一致的: 当纯的载气(沒有待分离出来组分), 流过检测器时,造成平稳的电子信号——基准线 当尚需分离出来组分根据检测器时 造成差异的数据信号 气象色谱仪检测器类型多种多样,有很多种归类: ①依据对被检验试品的回应范畴能够被分成: 通用性检测器:对绝大部分检验愚昧均有回应,如:TCD、PI。 挑选型检测器:对某一类化学物质有回应,对其它成分的无响应或不大,如:FPD。 ②依据检测器的检验方法不一样还可以分成: 浓度值型检测器:测量的是载气中某组分浓度值一瞬间的转变,即检测器的响应值和组分的浓度值成正比,如TCD、PID。 化检测器:测量载气中某组分单位时间内进到检测器的成分转变,即检测器的响应值和单位时间内进到检测器某组分的品质成正比,如FID、FPD。
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