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发布时间:2022-08-13 08:33:01
硼酸亲和层析介质
纳微推出新一代硼酸亲和填料,它是利用硼酸与顺式二羟基化合物之间的共价配位作用实现分离纯化。在碱性条件下,硼
酸基团能与顺式二羟基结构作用,生成稳定的五元环络合物,分子被介质吸附;在酸性条件下络合被打开,分子从介质上解吸
附。硼酸亲和层析介质可以用于含有顺式二羟基化合物的分离纯化,如糖蛋白、核苷、核苷酸、糖类等的分离纯化。
连续色谱层析技术
尽管传统色谱分离技术被广为采用,但其仍存在一系列问题亟待解决:
? 溶剂消耗量大,综合生产成本居高不下;
? 填料使用量大,单位填料产出少,工业化生产成本进一步提高;
? 某些低分离度品种分离受限,无法工业化;
? 对于某些特殊样品(如手性药i物),没有太好的解决办法等等。
然而连续色谱分离技术能够实现物料连续使用,应用同等规模的填料和溶剂却可大幅度提高样品处理量,对于某些化学结构相类似的成分,仍然能够获得较理想的分离度和样品回收率。该技术主要能够很好地解决大、小分子原i料药、功能糖等的连续化分离问题,在降低缓冲液用量的同时,提高填料利用率,降低生产成本,目前已经广泛应用于石油化工、食品工程和生***工等领域,如:
ü 糖醇类分离:果葡糖浆、菊粉、低聚果糖、海藻糖、阿拉伯糖、木糖醇、核糖等;
ü 手性药i物和天然产物分离:紫杉醇、鱼i油、芍药苷、大豆卵磷脂、氟i西汀、酮洛i芬等;
ü 精细化工:香精香料、色素、不饱和脂肪酸等;
ü 石化:PX及其类似物、碳五碳六中正异构烷烃等;
ü 生物大分子:蛋白多肽(亲和层析)、核酸等。
抗l体的层析分离步骤基本
都可以采用标准化的三步曲:步用Protein A介质进行抗l体捕获和浓缩;第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体,宿主蛋白等杂质;第三步是精纯去除剩余DNA,Endotoxin,Protein A 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中,步的Protein A亲和捕获占据分离纯化成本80%以上,也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因:首先是Protein A 价格昂贵,其价格是普通层析介质十几倍;第二,Protein A使用寿命短,一般离子交换填料使用寿命多达1000次,而亲和填料寿命通常在100-200次;第三,Protein A 用于抗l体的捕获和浓缩,需要处理大体积的发酵液,而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析,使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此,要降低抗l体的生产成本,解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步Protein A 亲和捕获。
层析填料寿命衰减的影响因素
样品状态
a.样品澄清度:样品越澄清对填料的寿命衰减影响越小。
b.样品粘度:样品的粘度越小,对填料寿命的影响越小。
c.样品酸碱度:过酸过碱都会加速填料寿命的衰减。
d.样品离子强度:离子强度越高填料寿命衰减的越快。
e.样品成分组成:样品成分越复杂,层析过程越复杂,填料的寿命衰减越快(这也与填料所处的工艺阶段吻合,捕获粗纯阶段填料寿命衰减的更快,精纯阶段填料寿命衰减的慢。)
层析工艺
a.柱床高度,流速及反压越大,工艺过程填料受到的外力就会增大,填料的寿命衰减就会增大。
b.层析工艺过程的缓冲液的种类及洗脱的CV数也会影响填料的寿命,缓冲液越温和对填料寿命衰减影响越小,洗脱CV数越小对填料寿命衰减影响越小。
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